高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽,待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。由于对灭菌结果的要求较高，因此在使用高压灭菌器时要十分注意，高压蒸汽灭菌法的注意事项主要有：
第一，无菌包不宜过大（小于50cm×30cm×30cm），不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。
第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。
第三，定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。
如何使用高压灭菌锅处理实验室废弃物及注意事项
实验过程中会产生许多废弃物，这些废弃物如果不好好处理则会污染实验室，给实验室的正常工作造成影响，甚至会危害到实验室人员的健康与生命，因此实验室废弃物的处理十分重要，下面就简单介绍一下高压灭菌锅处理实验室废弃物的方法和注意事项：
a）在主实验室将已经准备好的所有待灭菌的废物装入不同大小的塑料袋中或不锈钢筒中，在暂时储存和灭菌时，所有废物必须放在这些袋内并放入一个灭菌盘中。在灭菌前将双层的高压灭菌袋包好，废物在灭菌袋中的体积不得超过袋子体积的 3/4 ，灭菌袋用橡皮带捆好，但不能扎得太死，否则蒸汽不能进入塑料袋内影响灭菌效果。橙色一次性废物容器放在上述的双层灭菌袋中，在储存和灭菌期间必须保持安全放置，不锈钢废物容器必须牢牢地盖紧并安全地放入灭菌的盘内，每个袋子必须贴上灭菌指示带以评价灭菌效果。
b) 实验操作间产生的所有废物应该及时就地灭菌处理。如果灭菌器正在使用或由于其它原因不能马上使用，则废物必须放在灭菌盘内、灭菌袋内捆好并放在实验操作间内，在存放期间确保袋子无损坏。
c) 当高压锅消毒灭菌到时间后，在生物安全实验室的外部打开高压锅，取出物品放在废物收集处。
d) 当开始灭菌时必须确信灭菌锅内的水量合适，高压温度和时间设置正确。
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