新型显微镜下看清活细胞

南京军区福州总医院中心实验室 涂向东 
 
　　激光扫描共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微镜，具有高灵敏度、高速度、高精度的特点，是目前生物医学领域最先进的荧光成像和细胞分析工具之一，被称为“下一代活细胞成像仪”。尽管早就有所耳闻，但直到它正式在医院落户时，才真正体会到其魅力所在。

　　以激光作为新光源

　　提高图像清晰度    

　　激光扫描共聚焦显微镜用激光做光源，因为激光的单色性非常好，光源波束的波长相同，从根本上消除了色差。与此同时，采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的无数点，用十分细小的激光束逐点逐行扫描成像，再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。而传统的光镜是在场光源下一次成像的，标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍射光和散射光的干扰。因此，这两种图像的清晰度和精密度是无法相比的。

　　用激光扫描替代人眼

　　立体观察标本    

　　图像的扫描可以选择各种分辨率，最高达到4096×4096，每个通道4096个灰度级，确保能够观察到最细微的图像细节。此外，还应用高效离子沉积镀膜技术的滤光片，增加了系统的灵敏度。同时高速的扫描振镜与光谱分光检测装置的结合，使光谱成像的分辨率可以精确到2nm。

　　特别是加装的激光扫描装置，用计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像，再一次提高图像的清晰度。经过图像处理及三维重建软件，可沿X、Y和Z轴或其他任意角度来观察标本的外形及剖面，得到的图像是数字化的三维立体结构，可以在电脑中进行处理、分析和输出，从而能十分灵活、直观地进行形态观察，揭示亚细胞结构的空间关系，并满足延时观察实验的需要。

　　可动态观察活细胞

　　助力临床细胞研究    

　　激光扫描共聚焦显微镜能在不损伤细胞的前提下，对活组织、活细胞进行观察和测量，不仅省去了繁琐的脱水、脱蜡、染色等样品前期处理过程，而且观察过的样品还可以继续用于其他研究。高效光电倍增管还能将微弱的荧光信号放大，大大提高了灵敏度。这种功能对于细胞培养、转基因研究尤为重要。

　　激光扫描共聚焦显微镜主要用于观察活细胞，如细胞间通讯、细胞膜流动性、细胞器形态学变化等，以及组织光学切片、三维图像重建、特定成分的荧光定量和定位分析等。一台配置完备的激光扫描共聚焦显微镜在功能上完全能够取代以往的任何一种光学显微镜，它相当于多种制作精良的常用光学显微镜的有机组合，如倒置光学显微镜、紫外线显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微镜等。

　　（吴  志  张文明整理）